检测消毒剂重复接触后,实验动物产生皮肤变态反应的可能性及其强度。
实验动物
选用皮肤完好的健康白色豚鼠,雌雄各半,体重200g-300g。
实验分组
将豚鼠随机分为试验组、阴性对照组和阳性对照组,每组动物至少16只。
操作程序
(1)对试验组豚鼠给予受试物诱导和激发处理。阳性对照组给予阳性致敏物(如2,4-二硝基氯苯)诱导和激发处理。阴性对照组仅给予受试物激发处理。
(2)诱导处理浓度允许引起皮肤轻度刺激反应。激发浓度低于诱导浓度,不得引起原发性刺激反应。如果原液不引起皮肤刺激反应,诱导和激发均使用原液。
(3)于试验前24h将豚鼠背部左侧3cm*3cm范围去毛。取诱导浓度的消毒剂溶液(或原液)0.5ml(g),直接涂在2cm*2cm左侧去毛皮肤上或滴于同样大小的2层-4层纱布上,再将其敷贴在左侧去毛区。用一层无刺激塑料膜或油纸覆盖,再以无刺激胶布固定,持续6h。第7d和第14d以同样方法重复一次。
(4)在末次诱导后14d,将激发浓度的消毒剂溶液0.5ml(g)直接涂在2cm*2cm右侧脱毛皮肤上或滴于同样大小的2层-4层纱布上,敷贴于豚鼠背部右侧3cm*3cm去毛区。然后,用一层塑料膜或油纸和无刺激胶布固定,6h后将敷贴的受试物洗去。24h和48h后观察皮肤反应,对皮肤反应评分。
(5)实验室开展皮肤变态反应试验初期,或使用新的动物种属或品系时,需同时设阳性对照组,阳性对照物可使用2,4-二硝基氯苯。为保证试验方法的可靠性,在进行该类试验时,每隔半年应使用阳性对照物检查一次。若检测报告中需用非本次阳性对照组的实验数据时,应注明实验日期。阳性对照组的操作程序同试验组,以阳性致敏物替代受试物。
(6)阴性对照组,仅对动物给予受试物的激发浓度,每次试验必须设置。